乳腺癌耐藥細(xì)胞株是脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染后,單克隆篩選穩(wěn)定細(xì)胞株.另外一種是應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄病毒,慢病毒轉(zhuǎn)染,篩選穩(wěn)定
乳腺癌耐藥細(xì)胞株.
乳腺癌耐藥細(xì)胞株的脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染：在轉(zhuǎn)染24小時(shí)后,消化細(xì)胞并計(jì)數(shù).將細(xì)胞種到96孔板,保證每個(gè)孔2-3個(gè)細(xì)胞,這樣才能得到單克隆.待細(xì)胞貼壁后,加入抗生素篩選.篩選時(shí)間和濃度視細(xì)胞而定.一般G418一個(gè)星期作用,嘌呤霉素2-3天.脂質(zhì)體法篩單克隆時(shí)間較長,且效率低,大概只有1%.病毒轉(zhuǎn)染：先要用包裝細(xì)胞,一般為293細(xì)胞,包裝出病毒,再用病毒轉(zhuǎn)染目的細(xì)胞.包裝病毒視不同類型的病毒而定,一般要3-5天的時(shí)間.包裝好的病毒要測滴度,根據(jù)滴度決定轉(zhuǎn)染目的細(xì)胞的病毒量.轉(zhuǎn)染目的細(xì)胞1-2天后加抗生素篩選得到穩(wěn)定細(xì)胞株.病毒轉(zhuǎn)染得到穩(wěn)定乳腺癌耐藥細(xì)胞株的效率高,只是步驟繁瑣.
技術(shù)原理穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株（穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株）指在細(xì)胞中持續(xù)穩(wěn)定表達(dá)特定基因或干擾特定基因表達(dá)。穩(wěn)轉(zhuǎn)乳腺癌耐藥細(xì)胞株的目的基因質(zhì)粒DNA整合到細(xì)胞染色體上，使細(xì)胞長期穩(wěn)定表達(dá)該基因。用轉(zhuǎn)染質(zhì)粒或病毒侵染的方法將構(gòu)建好的含靶基因的載體導(dǎo)入細(xì)胞，根據(jù)不同的基因載體中所含的抗性標(biāo)志選用相應(yīng)的藥物進(jìn)行篩選混合陽性克隆。在陽性混合克隆的基礎(chǔ)上，得到單細(xì)胞長出的陽性單克隆，繼而得到穩(wěn)定轉(zhuǎn)染乳腺癌耐藥細(xì)胞株。常用的真核表達(dá)載體的抗性標(biāo)志物有嘌呤霉素（puromycin）、潮霉素（hygromycin）和新霉素（neomycin）。
