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MTT檢測細胞增殖凋亡的檢測原理是什么
更新時間:2018-03-26 點擊次數(shù):1962次
   MTT檢測細胞增殖凋亡細胞壞死和凋亡是兩種截然不同的細胞學現(xiàn)象,二者發(fā)生的過程在形態(tài)學上有很大的區(qū)別。在細胞壞死時,細胞膜發(fā)生滲漏,細胞內容物包括細胞器及染色質釋放到胞外。而在細胞凋亡過程,起始階段,染色質固縮、分離并沿核膜分布,細胞質亦發(fā)生固縮,但細胞膜依然完整未失去選擇透性;MTT檢測細胞增殖凋亡在凋亡后期,核染色質斷裂為大小不等的片斷,與某些細胞器如線粒體一起聚集,為反折的細胞膜包圍,后逐漸分離,形成凋亡小體。
  
  MTT檢測細胞增殖凋亡MTT法又稱MTT比色法,是一種檢測細胞存活和生長的方法。其檢測原理為活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍紫色結晶甲瓚并沉積在細胞中,而死細胞無此功能。二甲基亞砜能溶解細胞中的甲瓚,用酶聯(lián)免疫檢測儀在540或720nm波長處測定其光吸收值,可間接反映活細胞數(shù)量。在一定細胞數(shù)范圍內,MTT結晶形成的量與細胞數(shù)成正比。
  
  MTT檢測細胞增殖凋亡本身就是可以檢測細胞增殖的,你作細胞增殖方面的研究是要有陰性對照和陽性對照的,比如我們做脾淋巴細胞增殖實驗是用CONA作為陽性對照,而陰性對照是只加細胞的培養(yǎng)孔,在鋪96孔板是加100ul細胞懸液,然后把檢測的藥物和CONA(分別是100ul,用培養(yǎng)基稀釋的)加進去,陰性對照就是加10ul培養(yǎng)基即可,等到作用48小時加MTT,每孔20ul,等MTT作用4小時,可以用SDS裂解過夜,然后用酶標儀檢測OD值,增殖指數(shù)=樣品OD/陰性對照OD,如果大于1,說明有促進細胞增殖作用,我們實驗室已經用這種方法篩選到幾種有免疫增強作用的糖類啦,現(xiàn)在動物實驗都做啦,效果很不錯。
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