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免疫熒光實驗的主要步驟包括哪些
更新時間:2019-07-25 點擊次數(shù):1428次
   免疫熒光是在免疫學、生物化學和顯微鏡技術(shù)的基礎(chǔ)上建立起來的一項技術(shù)。它是根據(jù)抗原抗體反應(yīng)的原理,先將已知的抗原或抗體標記上熒光基團,再用這種熒光抗體(或抗原)作為探針檢查細胞或組織內(nèi)的相應(yīng)抗原(或抗體)。利用熒光顯微鏡可以看見熒光所在的細胞或組織,從而確定抗原或抗體的性質(zhì)和定位,以及利用定量技術(shù)(比如流式細胞儀)測定含量。
 
  用熒光抗體示蹤或檢查相應(yīng)抗原的方法稱熒光抗體法;用已知的熒光抗原標記物示蹤或檢查相應(yīng)抗體的方法稱熒光抗原法。這兩種方法總稱免疫熒光技術(shù),以熒光抗體方法較常用。用免疫熒光技術(shù)顯示和檢查細胞或組織內(nèi)抗原或半抗原物質(zhì)等方法稱為免疫熒光細胞(或組織)化學技術(shù)。
 
  免疫熒光細胞化學分直接法、夾心法、間接法和補體法。
 
  免疫熒光實驗的主要步驟包括細胞片制備、固定及通透(或稱為透化)、封閉、抗體孵育及熒光檢測等。細胞片制備(通俗的說法是細胞爬片)是免疫熒光實驗的步,細胞片的質(zhì)量對實驗的成敗至關(guān)重要,原因很簡單,如果發(fā)生細胞掉片,一切都無從談起。這一步關(guān)鍵的是玻片(SlidesorCoverslips)的處理以及細胞的活力,有人根據(jù)成功經(jīng)驗總結(jié)出許多有益的細節(jié)或小竅門,非常值得借鑒。固定和通透步驟重要的是根據(jù)所研究抗原的性質(zhì)選擇適當?shù)墓潭ǚ椒ǎ线m的固定劑和固定程序?qū)τ讷@得好的實驗結(jié)果是非常重要的。免疫熒光中的封閉和抗體孵育與其它方法中的相同步驟是類似的,重要的區(qū)別在于免疫熒光實驗中要用到熒光抗體,因此必須謹記避光操作,此外抗體濃度的選擇可能更加關(guān)鍵。后需要注意的是,標記好熒光的細胞片應(yīng)盡早觀察,或者用封片劑封片后在4℃或-20℃避光保存,以免因標記蛋白解離或熒光減弱而影響實驗結(jié)果。
 
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