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原位雜交為分子水平的研究提供了可靠的保證
更新時(shí)間:2020-01-15 點(diǎn)擊次數(shù):1253次
 
  
  原位雜交是在分子生物學(xué)領(lǐng)域應(yīng)用極為廣泛的實(shí)驗(yàn)技術(shù)之一,是在研究生物體發(fā)育過(guò)程中的一種極為重要的分子遺傳學(xué)的研究方法。隨著分子生物學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展,在分子病理和科學(xué)研究方面得到了日益廣泛的推廣和應(yīng)用。在原位雜交和FISH實(shí)驗(yàn)中,變性溫度是至關(guān)重要的環(huán)節(jié),也是確保實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵步驟。原位雜交儀可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)者的設(shè)置,自動(dòng)完成變性和雜交過(guò)程。嚴(yán)格的溫度控制,適宜的濕度環(huán)境,加上低廉的成本,和時(shí)間上的節(jié)省,為分子水平的研究提供了可靠的保證。
  
  原位雜交主要是基于以下這個(gè)主要原理:?jiǎn)捂湹腄NA或者RNA只要他們的序列是互補(bǔ)的,即符合AT,CG的堿基配對(duì)原則,那么這樣的兩條核酸鏈之間(DNA-DNA,DNA-RNA,RNA-RNA)就可以形成一個(gè)穩(wěn)定的雜交復(fù)合體。這一原理對(duì)于檢測(cè)一個(gè)特異的mRNA在某一種生物體,或者某些組織切片、單個(gè)細(xì)胞里具體表達(dá)位置非常有用。該技術(shù)zui早應(yīng)用于60年代末期,由于核酸分子雜交的特異性高,因此該技術(shù)已被廣泛應(yīng)用,例如與細(xì)胞內(nèi)RNA進(jìn)行雜交以觀察該組織細(xì)胞中特定基因表達(dá)水平。
  
  熒光原位雜交則是在放射性原位雜交技術(shù)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的一種非放射性分子細(xì)胞遺傳技術(shù),以熒光標(biāo)記取代同位素標(biāo)記的原位雜交方法,是利用熒光標(biāo)記的DNA探針來(lái)檢測(cè)在細(xì)胞、組織和腫瘤的特定DNA序列的分子診斷技術(shù)。首先將樣本DNA變性,加入特定的熒光標(biāo)記的探針與變性的樣本混合進(jìn)行雜交,退火得到雙鏈DNA。探針信號(hào)能夠被熒光顯微鏡捕獲,從而定性、定量地檢測(cè)目標(biāo)DNA。與其它用于研究染色體的技術(shù)不同,F(xiàn)ISH操作靈活,不需要在正在分裂的細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè),因而能夠用來(lái)檢測(cè)基因或染色體是否異常,通常用于遺傳咨詢,醫(yī)學(xué)和品種鑒定、DNA特定功能研究。利用FISH方法還可檢測(cè)非整倍體,微缺失綜合征以及基因重排等,這些指標(biāo)對(duì)遺傳性疾病,如白血病,淋巴瘤,實(shí)體瘤,自閉癥等發(fā)育綜合征有重要的臨床意義。
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