免疫沉淀是利用抗原抗體特異性反應(yīng)純化富集目的蛋白的一種方法。抗體與細(xì)胞裂解液或表達(dá)上清中相應(yīng)的蛋白結(jié)合后，再與ProteinA/G偶聯(lián)的agarose或Sepharose珠子孵育，通過離心得到珠子-蛋白A/G-抗體-目的蛋白復(fù)合物，沉淀經(jīng)過洗滌后，重懸于電泳上樣緩沖液，煮沸5-10min，在高溫及還原劑的作用下，抗原與抗體解離，離心收集上清，上清中包括抗體、目的蛋白和少量的雜蛋白。
原理：當(dāng)細(xì)胞在非變性條件下被裂解時(shí)，完整細(xì)胞內(nèi)存在的許多蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)間的相互作用被保留了下來。當(dāng)用預(yù)先固化在ArgaroseBeads上的蛋白質(zhì)A的抗體免疫沉淀A蛋白，那么與A蛋白在體內(nèi)結(jié)合的蛋白質(zhì)B也能一起沉淀下來。再通過蛋白變性分離，對(duì)B蛋白進(jìn)行檢測，進(jìn)而證明兩者間的相互作用。
這種方法得到的目的蛋白是在細(xì)胞內(nèi)與興趣蛋白天然結(jié)合的，符合體內(nèi)實(shí)際情況，得到的結(jié)果可信度高。這種方法常用于測定兩種目標(biāo)蛋白質(zhì)是否在體內(nèi)結(jié)合；也可用于確定一種特定蛋白質(zhì)的新的作用搭檔。
免疫沉淀技術(shù)，是一項(xiàng)專門研究蛋白質(zhì)相互作用的*技術(shù)，不過其現(xiàn)在也廣泛的應(yīng)用于基因領(lǐng)域的研究，比如轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)蛋白的作用、靶向蛋白受體的篩選、基因蛋白產(chǎn)物表達(dá)的研究、RNA參與遺傳物Chemicalbook質(zhì)復(fù)制的方式以及DNA修飾的機(jī)制等等。該技術(shù)擁有靈敏度高、準(zhǔn)確度高、特異性強(qiáng)的優(yōu)點(diǎn)，所以在專一性結(jié)合物質(zhì)的檢測和篩選中得到的很好的應(yīng)用，也成為相應(yīng)實(shí)驗(yàn)中減少實(shí)驗(yàn)程序并縮短實(shí)驗(yàn)時(shí)間的理想方法之一。
