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免疫沉淀是專門研究蛋白質(zhì)相互作用的*技術(shù)
更新時(shí)間:2022-03-28 點(diǎn)擊次數(shù):1011次
  免疫沉淀是利用抗原抗體特異性反應(yīng)純化富集目的蛋白的一種方法。抗體與細(xì)胞裂解液或表達(dá)上清中相應(yīng)的蛋白結(jié)合后,再與ProteinA/G偶聯(lián)的agarose或Sepharose珠子孵育,通過離心得到珠子-蛋白A/G-抗體-目的蛋白復(fù)合物,沉淀經(jīng)過洗滌后,重懸于電泳上樣緩沖液,煮沸5-10min,在高溫及還原劑的作用下,抗原與抗體解離,離心收集上清,上清中包括抗體、目的蛋白和少量的雜蛋白。
 
  原理:當(dāng)細(xì)胞在非變性條件下被裂解時(shí),完整細(xì)胞內(nèi)存在的許多蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)間的相互作用被保留了下來。當(dāng)用預(yù)先固化在ArgaroseBeads上的蛋白質(zhì)A的抗體免疫沉淀A蛋白,那么與A蛋白在體內(nèi)結(jié)合的蛋白質(zhì)B也能一起沉淀下來。再通過蛋白變性分離,對(duì)B蛋白進(jìn)行檢測,進(jìn)而證明兩者間的相互作用。
 
  這種方法得到的目的蛋白是在細(xì)胞內(nèi)與興趣蛋白天然結(jié)合的,符合體內(nèi)實(shí)際情況,得到的結(jié)果可信度高。這種方法常用于測定兩種目標(biāo)蛋白質(zhì)是否在體內(nèi)結(jié)合;也可用于確定一種特定蛋白質(zhì)的新的作用搭檔。
 
  免疫沉淀技術(shù),是一項(xiàng)專門研究蛋白質(zhì)相互作用的*技術(shù),不過其現(xiàn)在也廣泛的應(yīng)用于基因領(lǐng)域的研究,比如轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)蛋白的作用、靶向蛋白受體的篩選、基因蛋白產(chǎn)物表達(dá)的研究、RNA參與遺傳物Chemicalbook質(zhì)復(fù)制的方式以及DNA修飾的機(jī)制等等。該技術(shù)擁有靈敏度高、準(zhǔn)確度高、特異性強(qiáng)的優(yōu)點(diǎn),所以在專一性結(jié)合物質(zhì)的檢測和篩選中得到的很好的應(yīng)用,也成為相應(yīng)實(shí)驗(yàn)中減少實(shí)驗(yàn)程序并縮短實(shí)驗(yàn)時(shí)間的理想方法之一。
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