iTRAQ
iTRAQ技術(shù)原理：
iTRAQ試劑為可與氨基酸N端及賴氨酸側(cè)鏈連接的胺標(biāo)記同重元素(isobaric)。在質(zhì)譜圖中，任何一種iTRAQ試劑標(biāo)記的不同樣本中的同一蛋白質(zhì)表現(xiàn)為相同的質(zhì)荷比。
在串聯(lián)質(zhì)譜中，信號離子表現(xiàn)為不同質(zhì)荷比(114～117)的峰，因此，根據(jù)波峰的高度及面積，可以得到蛋白質(zhì)的定量信息。
技術(shù)特點(diǎn):
1．可同時標(biāo)記2~8 個樣本。
2. iTRAQ技術(shù)不僅可發(fā)現(xiàn)胞漿蛋白，還有膜蛋白、核蛋白、胞外蛋白。iTRAQ技術(shù)可檢測出低豐度蛋白、強(qiáng)堿性蛋白、小于10KD或大于200KD的蛋白。
3.可標(biāo)記修飾后的氨基酸，因此對磷酸化蛋白等翻譯后修飾蛋白進(jìn)行定性定量研究。
4.報告離子的相對分子質(zhì)量較低(113~121)，低分子量區(qū)是質(zhì)譜定性(質(zhì)量確定)和定量(豐度比較)較為準(zhǔn)確的區(qū)域，因此質(zhì)譜檢測更為靈敏可靠。
iTRAQ試劑包括三部分：
1. 報告基團(tuán)（reporter group）：相對分子量為113-121Da（無120），因此iTRAQ試劑可同時標(biāo)記8組樣品。
2. 平衡基團(tuán)（balance group）：相對分子量為192-184Da (無185)，使得八種iTRAQ試劑分子量均為305 Da，保證標(biāo)記的同一肽段m/z相同。
3. 肽反應(yīng)基團(tuán)：能與肽段N端及賴氨酸側(cè)鏈氨基發(fā)生共價連接，從而標(biāo)記上肽段 拿到蛋白樣品之后，不同組的樣品首先分別進(jìn)行等量酶切，每一個酶切得到的肽段樣品選擇一種標(biāo)記試劑進(jìn)行標(biāo)記反應(yīng)（每一個肽段至少含有一個游離的氨基進(jìn)行反應(yīng)）；然后將經(jīng)過不同標(biāo)記的肽段樣品混合后進(jìn)行后續(xù)的質(zhì)譜分析。
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